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PCR-RFLP HLA结果分析

点击次数：  更新时间：2015/12/22 11:22:33  

 参照限制性核酸内切酶酶切位点在HLA等位基因DNA序列上的分布情况，根据样本的PCR-RFLP结果，对样本的HLA基因型别进行判断。由于篇幅限制，仅介绍DR1纯合子亚型的鉴定作为说明。

 DR1纯合子样本各种等位基因的PCR-RFLP带型

DR1等位基因组合	限制性核酸内切酶
	Ava II	Pst I
0101/0101	1	1
0102/0102	1	0
0103/0103	0	1
0101/0102	1	2
0101/0103	2	1
0102/0103	2	2

 

0：无酶切位点； 1：一个酶切位点； 2：2个酶切位点（杂合子）

注意事项和经验总结

   1.  上述介绍的分型方法是用于HLA-DRB1高分辨率分型的PCR-RFLP技术，即已知DR型别样本的亚型鉴定，如果用该方法进行HLA-DR杂合子的亚型鉴定，其RFLP带型十分复杂，通常需要借助于计算机软件进行结果判断。如果进行其他HLA基因或者中分辨率分型，虽然操作过程类似，但必须改变实验条件（包括引物、扩增条件、限制性核酸内切酶的选用、结果解释等）。

   2.  用限制性核酸内切酶酶切PCR扩增产物时，可能出现酶切不完全，造成结果分析困难和错误。应采用相应核酸内切酶识别位点阳性的DNA作为对照，及时发现其中的问题并予以解决。

   3.  凝胶电泳时使用的DNA染料（如溴化乙锭等）是致突变剂，操作时应戴手套，并注意在规定的范围内操作，废液或废物应妥善处理。