免疫实验技术 您的位置：首页 > 实验方法 免疫实验技术

使用流式细胞仪进行人类单核细胞亚群的全血染色

点击次数：  更新时间：2015/12/25 14:42:25  

一、材料与试剂

1.  抗体

 

（1）鼠抗人CD56FITC（BD,340410）

 

（2）鼠抗人CD2FITC（BD555326）

 

（3）鼠抗人CD19FITC（555412）

 

（4）鼠抗人CD14PerCP（Invitrogen,MHCD1431）

 

（5）鼠抗人CD16PacBlue（BD,558122）

 

（6）鼠抗人HLA-DRAPC-Cy7（BioLegend,307617）

 

2.  其他材料

（1）带K3EDTA的玻璃全血管（BDVacutainer366450）

 

（2）10×BDFACS裂解液（BDPharmigen349202）

 

（3）20%甲醛（Tousimis1008A）

 

（4）PBS（CalciumandMagnesiumfree,Gibco20012-027）

 

（5）5 mL 聚丙烯管（BDFalcon352063）

 

二、仪器

1.  BDLSRII流式细胞仪

 

三、步骤

1.  将人血加入到带K3EDTA的玻璃全血管，然后轻摇几次混合血液。

 

2.  将100 ul 全血加入到5 mL 的聚丙烯管，并贴上标签。

 

3.  取各种抗体5 uL 到血样中，轻拍管混合血样。

 

4.  室温，黑暗孵育样品。

 

5.  加入2 ml 1×BDFACS裂解液（10×Solution dilutedin ddH2O）

 

6.  混匀样品三次，离心2~3 min。

 

7.  室温，1 200 rpm 离心7 min。

 

8.  除去上清，用200 ul 2%甲醛重悬沉淀。

 

9.  BDLSRII流式细胞仪检测样品。

 

10.  使用FlowJo分析数据。