细胞学 您的位置：首页 > 实验服务 细胞学

大鼠主动脉平滑肌细胞培养实验

点击次数：  更新时间：2016/11/11 9:26:50  

大鼠主动脉平滑肌细胞培养实验

大鼠主动脉平滑肌细胞培养可以：

（1）获得大鼠主动脉平滑肌细胞；

（2）用于血管疾病研究；

（3）用于动脉疾病研究。

实验方法原理:运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养，并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

实验材料:SD大鼠

试剂、试剂盒:PBS、FBS、DMEM

仪器、耗材：手术剪、手术钳、眼科剪刀、眼科镊子、大头针、手术刀、培养皿

实验步骤

一、实验步骤

 

1. SD 大鼠(150-200 g)，断头，浸入75%的酒精中15 min。

 

2. 置入超净台中，将大鼠固定于杀鼠板上，在无菌条件下打开腹腔，分离出胸主动脉、腹主动脉， 摘出。

 

3. PBS 清洗3 遍，剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其移入1 mL 的培基中、剪成1×1 mm2 大小组织块。

 

4. 再将PBS清洗组织块，移入25 mL 的培养瓶中，用尖嘴弯管均匀贴好组织块，放入37℃、5% CO2的培养箱倒置培养6 小时后，待组织块贴壁后，再加入2.5 mL 培养液后放回培养箱中。

 

5. 随后每3 天予以全量换液。

 

二、结果

 

3-5 天后可见组织块周围有细胞爬出，大约2 周后80－90%融合。

 

注意事项

1.  第四步中最后加入2 mL 培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下，勿使组织块吹下。