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酶联免疫吸附实验（双抗体夹心法）

点击次数：  更新时间：2016/11/14 15:37:02  

实验材料:待检血清

试剂、试剂盒:马抗人IgE抗体辣根过氧化物酶标记的马抗人IgE 抗体碳酸钠-碳酸氢钠洗涤液BSA 溶液H2SO4

仪器、耗材: 酶标板

实验步骤

1.包被酶标反应板，加 1:500 马抗人IgE 抗体（IgG），0.2 ml/孔。37 ℃ 孵育 2 小时后洗涤3 次，10 分钟/次。

 

2.封闭，加入 1 %BSA ，0.3 ml/孔，4 ℃过夜。取出，洗涤同上。

 

3.待检血清，加入不同稀释度的待捡血清，0.1 ml/孔。37 ℃孵育 40 min 后，洗涤同上。

 

4.酶标记抗体，加入适当稀释度的酶标抗体，0.1 ml/孔。37 ℃孵育40 min 后， 洗涤同上。

 

5.底物，加入OPD（邻苯二胺）溶液，0.15 ml/孔。室温30 分钟。

 

6.终止液，加入 5N HCI ，0.1 ml/孔。

 

7.于 20 min 内，用酶标仪测定各孔OD 值，测定波长495 nm。

 

注意以下事项

1.实验时应分别设阳性对照与阴性对照孔，每一待检样品应平行作两份，以保证实验结果的准确性。

 

2.实验时，用羊血清、兔血清或BSA 封闭以防止非特异性反应的发生。