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miRNA动物实验方法及应用案例集锦

点击次数：  更新时间：2016/3/7 11:48:59  

miRNA动物实验方法

　　miRNA动物实验方法

　　简介：

　　miRNA作为生命科学最为热门的研究领域之一，动物实验已经成为阐明miRNA自身功能不可或缺的关键环节，也是搭建基础研究到临床应用的桥梁，其重要性正日益显现。

　　动物实验影响因素多，难度大，成本高。为了解决广大科研工作者面临的这些难题，锐博生物利用自身多年积累的先进技术，成功开发出国际一流品质miRNA研究工具：micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir。本产品采用特殊化学修饰和末端标记技术，增加体内细胞的吸收作用，提高其抵抗RNA酶降解的能力；经高度脱盐处理，降低毒副作用，使其在动物实验中操作简单，且发挥稳定和高效的作用。

　　应用：

　　micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir在miRNA功能实验中具有非常重要的作用，分别通过模拟miRNA的作用和竞争性抑制/特异性降解内源miRNA的作用而进行功能获得性（gain-of-function）和或功能缺失性（loss-of-function）研究。micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir具有更高的稳定性，在复杂的环境中能保持更长时间的活性，同时具有更高的细胞透过率，在没有转染试剂的情况下，也可以克服细胞膜等障碍而进入靶细胞中发挥作用。micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir可以通过局部注射或尾静脉注射等多种方式给药，可作用于局部的组织如大脑、肌肉、皮肤、眼睛、鼻腔、耳蜗、肿瘤块等，或者体内血管丰富的器官组织，可维持长达数周的效果。

　　表一  miRNA功能研究常用工具比较

 

 

　　经过几年的实践检验，锐博生物推出的micrONTM agomir和micrOFFTM antagomir被证明具有良好的动物实验效果，已经应用于脑，鼻窦，骨，附睾，脾脏，肝脏，心脏等各种动物模型的miRNA动物实验。这些采用miRNA agomir和antagomir的miRNA动物实验中，大多数采用局部注射给药方式或尾静脉给药方式，给药周期需依据实验内容而定。 

　　图1  micrONTM agomir和micrOFFTM antagomir已经应用于各种动物模型的动物实验

　　应用实例1：各种组织及器官

　　Silencing of microRNAs in vivo with 'antagomirs'.

　　Krützfeldt J, et al. Nature. 2005

　　简介：

　　Jan Krutzfeldt等人发现，与miRNA inhibitor相比，micrOFFTM antagomir可以有效地抑制多种组织器官中内源性miRNA表达，并且其抑制效果可以持续23天。通过对antagomir进行突变，以及交叉验证，发现antagomir具有很高的特异性，可以实现在动物体内进行miRNA loss-of-function实验。

　　实验方法与结果：

　　对6周龄C57BL/6J小鼠尾静脉注射80 mg/kg体重的antagomir-16，连续注射三天，并在最后一次注射的24小时后收集各器官组织提取RNA。

 

 

实验结果：

      

 

　　图2      经Northern Blot检测，通过尾静脉注射antagomir-16，小鼠的肝、肾、肺、心脏、骨骼肌、皮肤、肾上腺、卵巢、小肠、结肠、脂肪及骨髓中的miR-16表达均受到抑制。

　　应用实例2：心脏

　　MicroRNA-328 contributes to adverse electrical remodeling in atrial fbrillation.

　　Lu Y, et al. Circulation. 2010

　　简介：

　　来自哈尔滨医科大学的研究人员使用风湿性心脏病房颤患者的心房标本及利用快速起博诱导房颤的实验犬心房标本，通过miRNA表达谱芯片及定量PCR分析，发现miR-223、miR-328及miR-664在房颤标本中表达上调而miR-101、miR-320及峭miR-449则表达下调。其中，miR-328在犬房颤标本中上调3.9倍而在人房颤标本中上调3.5倍。进一步的研究发现，利用腺病毒过表达miR-328的实验犬及miR-328转基因小鼠均表现出房颤易感增强、L型钙离子通道电流减弱及心房肌动作电位时程缩短等心颤表型，而采用micrOFFTM antagomir-328抑制miR-328的作用或敲除内源的miR-328则能逆转这些现象。该研究还揭示，miR-328在房颤中的功能可能是通过其靶标基因CACNA1C和CACNB1实现的。

　　实验方法与结果：

　　miR-328转基因小鼠或野生型小鼠连续三天尾静脉注射micrOFFTM antagomir-328 （80 mg/kg体重），再通过测心电图以检验miR-328对小鼠房颤的影响。

 

实验结果：
 

 

　　图3    注射antagomir-328后，小鼠体内miR-328表达水平降低且房颤程度下降，而注射对照（不配对）的

　　antagomir则无此效果。