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小鼠肥大细胞的形态学观察实验

点击次数：  更新时间：2017/1/20 13:57:15  

小鼠肥大细胞的形态学观察实验

实验方法原理 肥大细胞的胞质中充满许多粗大的水溶性、嗜碱性和异染性的颗粒，颗粒中含有多巴胺，组胺，肝素。5-羟色胺等活性物质。这些物质中含有多硫酸脂和硫酸黏多糖类，能与异染性染料结合，因此，用中性红、美蓝、甲苯胺蓝等染料处理上皮组织均可将肥大细胞胞质中的水溶性、嗜碱性和异染性的颗粒显示出来。

实验材料 成年小鼠

试剂、试剂盒 A-F固定液、甲苯胺蓝染色液、冰醋酸分色液

仪器、耗材 显微镜、解剖剪、解剖镊子、废旧针头、解剖盘、载片、盖片

实验步骤

1．小鼠皮下组织铺片制作

 

（1）断颈法处死小鼠

 

（2）解剖小鼠取结缔组织

 

（3）将组织铺于干净的载玻片上，用废旧针头剥离组织，越薄越好，大小在0.5cm×0.5cm即可。

 

（4）自然晾干待用

 

2．甲苯胺蓝染色显示肥大细胞

 

（1）固定：取晾干的铺片于A-F固定液中固定5min

 

（2）水洗：取固定后的铺片于细水冲洗1min

 

（3）染色:将冲洗后的铺片入0.5%甲苯胺蓝染色液中染色30min

 

（4）水洗：取染色后的铺片于细水冲洗2min

 

（5）分色：入1%的冰醋酸中数秒

 

（6）水洗：取分色后的铺片于细水冲洗2min

 

（7）镜检：显微镜下观察（脱水、透明、中性胶封片后效果更佳）