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ELISA免疫测定，你真的学会了吗？

点击次数：  更新时间：2017/10/11 15:39:45  

ELISA免疫测定目的是？

1.测定体液中的各种蛋白质，包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等；

2.测定激素，包括小分子量的甾体激素等；

3.测定抗生素和药物；

4.测定病原体抗原，HBsAg、HBeAg等；

5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等；

ELISA免疫测定原理

①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标 抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或 抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。

ELISA免疫测定步骤

1.　包被；

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)；

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟；

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml；

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。

ELISA免疫测定流程图

引起ELISA测定错误结果的原因

标本因素、试剂因素、操作因素。