二. 操作步骤

1．通过离心来沉淀细胞后，弃上清，用移液管加TRIZOL试剂反复吹打来裂解细胞至均一通亮的液态后，将匀浆样品在15—30°C 条件下孵育5 分钟以使核蛋白体完全分解。（每5—10×106的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×107 细菌加1ml的TRIZOL。在加入TRIZOL前应避免洗涤细胞因为那样会增加mRNA降解的可能性。） 

2．分离阶段 

每1 mlTRIZOL 加0.2 ml 氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15 秒并将其在30°C 下孵育2—3 分钟。在2—8°C 下以不超过12,000×g 的离心力高速冷冻离心15 分钟。离心后混合物分成三层：下层红色的苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA 无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIZOL 容量的60% 

3．RNA的沉淀 

将水样层转移到一干净的试管中，通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。最初均化时的每1 mlTRIZOL 对应0.5 ml 异丙醇。将混合的样品在 15—30°C 条件下孵育10 分钟并在2—8°C 下以不超过12,000×g 的离心力高速冷冻离心10 分钟。RNA沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。 

 4．RNA的洗脱 

移去上层悬液。用75%的乙醇洗涤RNA 沉淀一次，每1 ml 的TRIZOL 至少加1 ml 的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2—8°C 下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离心5 分钟。

 5．RNA的再溶解 

在操作的最后，简单干燥RNA沉淀。尤为重要的是，不能让RNA沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA样品其A260/280 比值< 1.6。用移液管尖分几次移取无RNA酶的水或0.5% SDS溶液来溶解RNA，并在55—60°C下孵育10 分钟。

三. 注意事项