将已收获的标本滴在玻片上，在显微 镜下观察滴片质量并标记杂交区域。

理想的标本 质量为：细胞分布均匀不重叠，密度适中，胞浆 含量少。将玻片放入已37℃水浴预温的 2×SSC 溶液中，老化30 min。70％ 、85％ 、100％ 的乙 醇中室温下梯度脱水各2到3分钟，室温下晾干。

玻片DNA变性：

将玻片放入已在73±1℃  水浴中预热的70%甲酰胺/2×SSC混合液  中，每缸≤4张玻片变性3～5min，取出分  别在70%、80%、100%冰乙醇缸中脱水各2分  钟而使变性终止。玻片室温下晾干。   

▲ 探针变性： 

①探针准备（按产品说明书配制不同探针） 

例：LSI BCR/ABL双标双融合易位探针准备如下：

a. 杂交液（buffer）   7μl 

b. H2O                      2μl 

c. 探针                       1μl 

d. 加入到0.5ml离心管中混匀，离心1～3秒。 

②将装有探针的离心管放入73±1℃水浴箱中，变 性处理5分钟，移至37℃水浴箱中预杂交5min。 

▲ 杂交：将10μl探针加在玻片上已划定的杂  交区域内，用22×22mm盖玻片盖好，注意  避免气泡的出现，再用封片胶封好四周，  略干后放入保湿盒内，在37℃恒温箱中杂  交16～18h。   

▲洗涤：

①将3缸50%甲酰胺/2×SSC溶液中，2缸 2×SSC置46±1℃水浴箱中预温30 min。

②将杂交后的玻片去除盖玻片依次放入已 46±1℃预温的1、2、3号50%甲酰胺/2×SSC 溶液缸中，每缸≤4张玻片，洗涤各10 min。

③将玻片转至已46±1℃预温的2×SSC溶液 中，洗涤各5 min。 

▲ 复染：每个杂交区域加DAPIⅡ10μl，盖玻 片封片，室温中复染15分钟。  

▲ 镜检：每张片随机分析计数200～1000个间 期核，并记录杂交信号。

▲杂交仪法

玻片准备：同甲酰胺程序的玻片处理

探针准备：同甲酰胺程序

杂交：    

①将10μl探针混合液加在玻片上划定的杂交区域 内，用22×22mm盖玻片盖好，封片胶封片，将 玻片放入杂交仪或恒温热平台上  

②杂交仪设置：变性温度72-75℃，时间2～5min， 杂交温度37℃，时间16～18h 

洗涤：同甲酰胺程序

复染：同甲酰胺程序

镜检：同甲酰胺程序

▲快速BM涂片 

1）标本处理：骨髓涂片放入3:1 甲醇冰醋酸固定液中5-10 分钟；2×SSC溶液两缸各浸泡5分钟  • 70％ 、85％ 、100％ 的乙醇中室温下梯度 脱水各2到3分钟，室温下晾干 暗视野下选取杂交区域，其余步骤同杂交仪法。

（石蜡切片实拍图）

2）石蜡切片FISH 

组织切片的制备、脱蜡和水化 

①制备 切片机切下厚度为4-5um组织，37℃水浴展 片，贴于玻片上，晾干，56 ℃烤过夜。 

②脱 蜡  用钻石笔标出杂交区域，将切片浸入二甲 苯中,10分钟×2次，室温用100％的无水乙醇脱水， 5分钟×2次 ③水化 将玻片依次浸入室温100%、85%、70% 乙醇各2分钟水化。

3）增强组织通透性处理

①将蒸馏水和2ml EDTA加入压力锅烧沸

②将玻片置入沸水中，加热至喷汽

③转入蒸馏水中2分钟  

4）蛋白酶处理 

①将蛋白酶预温至37 ℃，切片浸入20分钟

②转入蒸馏水中1分钟，再依次脱水

③室温风干  

5）FISH杂交、洗涤、观察同“杂交仪法”  

膀胱癌脱落细胞FISH

收集晨尿，离心，收集细胞沉淀。

低渗、预固定和固定同“染色体制备”。

FISH操作步骤同“杂交仪法”。

镜检注意：选择DAPI下染色不均一、核大、椭圆的脱落细胞观察，排除炎症细胞。