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自噬MDC染色这一教程，值得入手！

点击次数：  更新时间：2017/10/24 11:00:19  

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。Leagene细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。

一. 实验材料及试剂

培养板、荧光显微镜、酒精灯、移液枪、CO2培养箱、酶联仪等；Wash Buffer、MDC 、collection buffer 等。

二、实验内容

细胞进行MDC染色：

配制染色工作液：以1×Wash Buffer：MDC染色体积比=9:1稀释染色液至工作浓度，计算一次实验所需要的染色液体积，配制MDC染色工作液，轻轻混匀。

实验方法：当细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，弃去培养液，加入300 uL 1×Wash Buffer 洗两次，每孔加入100 uL MDC染色工作液，室温避光染色15~45min后，弃去染色液，以1×Wash Buffer 300 uL洗三次，再以100 uL的collection buffer 覆盖细胞爬片，荧光显微镜，激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm观察，技术、拍照。

三、注意事项

1、MDC Stain和EB，试剂有一定毒性，请小心操作。

2、吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

3、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。