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HE染色在临床病理诊断中的应用

点击次数：  更新时间：2017/3/4 13:33:07  

HE染色

苏木精-伊红染色法(hematoxylin- eosin staining),简称HE染色法,是石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。苏木精是一种天然染料,它本身并不能染色,在经氧化后变成苏木红才是真正的染料,苏木精对细胞核的亲和力并不强,而在媒染剂的帮助下才能较好的显示细胞核,此时细胞核呈红色,只有在碱性环境中,苏木红才变成蓝色。伊红Y是人工全盛染料,它可能是通过渗透或弥散作用完成染色的,因此和组织万分结合是不牢固的。它对细胞质着色。一般的组织变化和组织产物都可以通过这一染色法显示出来。是形态学最常用的染色方法。直到目前为止,病理组织学的基本知识,绝大多数都是从观察HE染色标本中得来,在质量较佳的HE染色切片上,各种组织或细胞的一般形态结特点都可以观察到。

对手术室切除的全部或部分器官或大块组织切除标本;各种纤维内窥镜取材的小块组织标本:各种穿刺取材的穿刺小标本,各种细胞学标本,一些特殊检查的体液或血液标本,在取材时要做到准确、迅速、完整和具有代表性,从而保证组织病理的制片质量。病理科选材制片时根据不同组织用不同固定、脱水时间,不同的制片染色方法,例如:各种穿刺取材的小标本固定、脱水时间应缩短,脂肪组织固定脱水时间应延长。硬组织用新切片刀制片。软、破碎组织和活检组织已使用过旧切片刀制片。

HE染色时根据不同组织选不同染色、脱水、脱腊时间。

   

1)二甲苯去蜡(经2次)5～ 10 min。2)无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各1～ 2 min,然后蒸馏水洗3 min(换数次)。3)苏木紫液染色约3～ 5 min(视染液种类和着色情况增减)。4)水洗;1%酸性乙醇(盐酸1 mI,70%乙醇99 ml),或1%盐酸分化。显微镜下控制。5)流水浸洗至少15 min,至细胞核呈蓝色。也可短时水洗后,浸于40℃温水使核变蓝。显微镜观察,若核染色过深或不足,应再分化或重染。6)伊红液染0.5～ 1 min后,95%乙醇2次,无水乙醇2次,每次约1～ 2 min。7)苯酚二甲苯(1∶ 3)5 min。8)二甲苯2次,每次3～ 5 min。9)用中性树胶或DPX以盖片封片,贴标签。

染色各步骤所需的时间,常受温度、切片厚度等影响,可根据镜下观察所见酌情予以调整。各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料着色效果常因生产厂和批号不同而异,启用任何新品,均应先试染。配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内,瓶签应写明名称、含量、配制年月日,顺序保存于避光橱中,必要者放冰箱内。凡须临用时配制者,配量应适当。但对组织化学反应(尤其是酶),其时间、温度等因素务必恒定,且应做对照片。染液着色力显著减退时应更新,染色反应不正常,应检查染液及试剂是否失效或误用。染色过程中,勿使切片干燥,以免影响细胞形态。染色完毕后用显微镜检查染色结果,是否符合要求,并核对标本种类、号码、数量是否无误,以保证制片的质量,为临床病理诊断垫定坚实基础。

组织细胞取材、固定、脱水、切片的质量对HE染色影响很大,组织染色的质量直接影响到临床诊断,同时也影响临床治疗。所以对各种不同的标本取材要求不一样,包括取材的范围、取材方法,取材用的工具或者同样的工具要求采用不同的使用方法来切取标本。以防挤压组织,引起组织结构的变形。钳取困难时可采取针吸,实质性脏器肿物直径大于2 cm者均可针吸。例如,肺癌表面常覆盖有一层较厚的凝固性坏死或脂性分泌物,为提高标本的阳性率,可采用针吸方法,深部取样,体液量多要取其离心后的沉渣。骨组织要进行脱钙,否则造成制片困难,破坏细胞结构,HE染色得不到良好的效果,影响临床病理诊断。

凡是需要送检的各种组织,除了有特殊要求外,都要首先固定。固定的目的在于尽量使组织和细胞保持与活体时相似的成份和形态,防止组织自溶和细菌性腐败的发生使原有构造消失影响诊断。不能固定又不能及时送检处理的标本要尽快放在低温或超低温条件下保存,固定标本所选固定剂及容器应据标本类型和检查项目而定。通常用10%福尔马林或95%酒精固定,这是最常用的固定液。但仍应及时送检,防止组织固定时间过长变脆、变硬影响制片的效果,因此而影响诊断,给病带来治疗上的困难。固定组织时,固定液要足量,一般至少应为组织块总体积的5～ 10倍以上,而且应在组织取下后立即或尽快放入适当的固定液中。大多数组织的固定时间为3～ 24 h,然后保存于70%酒精中。可在室温25℃固定,如低温(如4℃)固定时,固定时间应相应延长。最常用的固定方法为浸泡固定法。

HE染色要注意各种试剂的浓度和量及环境温度和湿度,确保制片的质量,组织染色的质量直接影响到临床诊断,同时也影响临床治疗,在日常工作中病理技术人员要严格遵守各项操作规程,保证临床资料的准确性,保证病理诊断的准确性。通过对不同的组织病理采用不同的固定、脱水、制片、HE染色方法,使甲级制片率上升到96%以上,乙级片和丙级片下降20%,杜绝丁级片,大大的提高了HE染色质量及制片的质量,提高了病理诊断准确率,也提高了临床治愈率,为临床提供准确的病理资料。由此也认识到病理技术HE染色是病理诊断、临床诊断、临床治疗中不可确少的一个重要组成部分,通过它可以做出正确的病理诊断和发现寻求别的辅助方法,以达到准确完整的病理诊断。