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细胞总RNA的提取

点击次数：  更新时间：2017/8/1 9:51:19  

    细胞总RNA的提取

    1.六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，枪头吹打。

    2.将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12,000g，15min）。

    3.离心后液体分为三层（上层－无色水样层为RNA，中层白色为DNA和底层红色为蛋白质），小心吸取上层无色液体移入一新的EP管中。

    4.加入等体积异丙醇，0.4－0.5ml，混匀，15-30℃下孵育10－30min，离心（4℃，12，000g，10min）。其中如果加入等体积异丙醇后，置于试管架上用PE手套密封后，放于4℃冰箱中，沉淀30min效果更好。

    5.去上清，沉淀加入75％乙醇1ml，漩涡振荡30s，离心（4℃，7,500g，5min）。

    6.小心去上清，管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3-5min。最好是用枪头吸取上清，尽量除去。

    7.加入20ul DEPC水溶解，分装5ul/管，-70℃冰箱保存。

    8.细胞总RNA的鉴定：0.9-1.2％琼脂糖电泳鉴定细胞总RNA，观察出现条带及各条带亮度。紫外分光光度计测定：分别测定细胞总RNA在260nm和280nm处的光密度值(OD)，并计算RNA的含量和纯度。

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