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核酸及核蛋白染色体

点击次数：  更新时间：2017/8/12 19:19:10  

一、Feulgen氏染色法：  该方法是显示DNA的一种常用方法。其基本原理是在酸水解下，去DNA中的嘌呤，使脱氧核酸的醛基暴露出来，然后再与Schiff氏试剂反应，生成紫红色产物，用于显微分光光度计和流式细胞测量计对细胞进行静态DNA测量和流式细胞测量。

　　

操作方式：

　　

（1）切片常规脱蜡至水。

　　

（2）蒸馏水洗，1NHCI水溶稍洗。

　　

（3）浸入1NHCI水溶液60℃，8-10分钟。

　　

（4）取出后，1NHCI水溶液稍洗，蒸馏水洗数次。

　　

（5）入Schiff氏液中室温下，暗环境30-90分钟。

　　

（6）流水冲洗数分钟。

　　

（7）常规脱水、封片。  结果：DNA呈紫红色。

　　

注意事项： 1、1NHCL、Schiff液的配制方法见前。

　　

2、该染色的优劣很关键。在于组织的固定。用甲醇85ml，福尔马林10ml，冰醋酸5ml配制的固定液效果很好。此外1NHCL液中酸化时间需严格控制。

　　

3、5%亮绿淡复染，使胞浆及其它组织呈绿色。

　　

二、核仁组成区蛋白显示法(PLOTON改良法)  核仁组成区(Nucleolar Organier regions,NORS)是转录核糖体RNA(rRNA)的染色体片断并与嗜银酸性非组蛋白有关。核糖体RNA基因直接控制着核糖体和蛋白质的合成，因此，计数细胞内的AgNORS的数量可反映细胞增殖的情况。经典的方法是经Plotor改进的银染法。  操作方法：

　　

（1）切片脱蜡入水。

　　

（2）蒸馏水洗。

　　

（3）去离子水洗。

　　

（4）切片至ploton氏银液中室温下，暗环境60-90分钟。

　　

（5）去离子水洗。

　　

（6）蒸馏水洗。

　　

（7）常规脱水封片。

　　

结果：AgNORS位于细胞核内呈黑色的颗粒状。

　　

试剂的配制：

　　

1、1%甲酸、2%明胶溶液(甲液) 甲酸 1ml 明胶 2g 去离子水 100ml

　　

2、50%硝酸银(乙液) 硝酸银 50g 去离子水 100ml 3、ploton氏银溶液 将甲液与乙液按1:2的比例于临用前混为ploton氏银溶液。

　

注意事项：

　　

1、所用器皿需经酸缸清洗。

　　

2、甲液配制时，应先按1%的浓度配制好甲酸液，再以此作为溶液溶解明胶。

　　

3、有人用双蒸水替代去离子水也可达到上述效果。

　　

4、银染后，用0.1%氯化金调色1-3秒，可使背景变清，效果更佳。