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层析技术概念、原理、分类（凝胶层析和离子交换层析）

点击次数：  更新时间：2017/8/14 11:12:09  

一、概念

   

利用混和物中各组分理化性质（吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数）的差异，在物质经过两相中进行分离的一种技术。
本世纪初（1903年），俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素，还含有其他色素，实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化、分子生物学及其它学科领域有效的分离、分析工具之一。

二、原理

   

具体过程：

   

可分离物质：糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸。

 

三、分类

   

1.  按两相所处物理状态分类
   

气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体。
   

液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体。
   

2.  按层析方式分类
   

柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离。
   

薄层层析：将适当粘度的固定相均匀铺在薄板上，点样后，用流动相展开。
   

纸层析：用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开。
   

3.  根据层析原理分类：常用分类法
  

（1）吸附层析：固定相是固体吸附剂，通过对不同溶质吸附力强弱不同进行分离。
  

（2）分配层析：利用两相中的分配系数不同。
   

分配系数：当一种溶质在两种给定的互不相溶的溶剂中分配时，在一定温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度比值为一常数，即分配系数（Kd）
   

Kd＝Ca / Cb
   

Ca和Cb分别代表某一物质在互不相溶的两相，A相（动相）和B相（静相）中的浓度。
  

（3）离子交换层析：固定相是离子交换剂，各组分与其亲和力不同
  

（4）凝胶层析：固定相是多孔凝胶，根据流动相中溶质的分子量大小差异进行分离
  

（5）亲和层析：利用固定相载体表面偶联具有特殊亲和作用的配基，与溶质分子发生可逆的特异性结合进行分离
  

（6）金属螯合层析
  

（7）疏水层析
  

（8）反相层析