细胞实验技术 您的位置：首页 > 实验方法 细胞实验技术

基于细胞的酶联免疫检测实验

点击次数：  更新时间：2017/8/15 13:47:09  

基于细胞的酶联免疫检测实验（Cell Based Elisa）可以：

（1）检测高通量的样本，定量细胞膜上或细胞内的蛋白质的表达情况。

（2）用于磷酸化蛋白质的检测，易降解蛋白质的检测，少量细胞目的蛋白质的检测。

 

试验方法原理

 

先将细胞种于 96 孔板中，对细胞进行不同条件的处理。待检测目的蛋白时，对细胞进行多聚甲醛的固定、灭活、打孔及封闭非特异性结合位点。根据抗原抗体反应的原理，一抗孵育与目的蛋白质结合，加入酶标记二抗与一抗结合，加入底物显色后酶标仪读取数值。

 

实验材料

细胞

试剂、试剂盒：  多聚甲醛 Cell Based Elisa 试剂盒

仪器耗材： 移液枪 酶标仪 恒温箱

 

实验步骤

 

1 将细胞种于 96 孔培养板中。

2 培养细胞，根据实验设计对细胞进行不同条件的处理。

3 待检测目的蛋白时，对细胞进行多聚甲醛的固定、灭活、打孔及封闭非特异性结合位点。加入一抗孵育与目的蛋白质结合，加入酶标记二抗与一抗结合，加入底物显色后酶标仪读取数值。

4 细胞清洗后加入结晶紫与细胞核结合读取数值，作为内参值进行比对。

5 数据处理。

 

注意事项

 

1 根据细胞的大小和生长情况进行种板和培养，待检测时细胞的密度控制在 75-90%。

2 对于悬浮细胞，加入 100ul 10ug/ml 的多聚-L-赖氨酸，37℃ 的条件下处理 30 min 将悬浮细胞贴壁到培养板上，PBS 清洗两次，每次 5 min。

3 若是悬浮细胞，加入 100ul 的 8% 多聚甲醛室温孵育 25-30 min 将细胞固定。

4 甲醛具有挥发性，终止液具有腐蚀性，请带好防护设备。

 

优势

 

1 样本的制备过程中，不涉及裂解细胞，只需将细胞及蛋白质原位固定，降低蛋白质发生降解的可能性。

2 在操作过程中，不涉及传统免疫印迹法的制胶，跑胶，转膜，曝光等步骤，为研究人员节省很多时间。

3 整个操作在 96 孔板中进行，容易实现高通量样本的检测，或者少量细胞目的蛋白质检测。

4 操作简单，很容易实现多个平行，多次重复，所得数据具有统计分析意义。 

（本文转载丁香通）