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实验中二抗选择要注意些什么

点击次数：  更新时间：2017/9/7 14:48:50  

实验中在选择二抗时必须注意以下几点：

1、一抗种属来源主要根据一抗种属来源来决定确定二抗的类型如一抗是小鼠来源那二抗就买抗小鼠的即可如羊抗小鼠、兔抗小鼠等均可。

2、一抗类型 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述如果你的一抗是小鼠IgM那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM. 如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类IgG1IgG2aIgG2bIgG3那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗例如如果你的一抗是小鼠IgG1那么你可以选择抗IgG1的二抗此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下可以选用抗相应物种IgG。

3、标记物的选择 一般来讲耦联到二抗上的探针主要有酶辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAPPAP荧光基团FITC RRX TR PE和生物素

选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA最常用的二抗是酶标二抗而细胞或组织标记实验细胞免疫化学组织免疫化学流式细胞术中通常使用荧光基团标记的二抗免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号可以使用biotin/avidin检测系统。已有的仪器可发光的波段进行选择。