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动物组织培养准备技术之清洗与灭菌（2）

点击次数：  更新时间：2018/3/30 14:12:52  

动物组织培养准备技术之清洗与灭菌（2）

 （四）消毒与灭菌

1.物理消毒法

1）射线消毒

  主要是使用60Co、X射线进行灭菌消毒，可用于牛血清和塑料制品的灭菌。

2）紫外线消毒

  用于空气消毒，操作台面和一些不能用干热，湿热消毒的培养器皿，如塑料培养皿，培养板等，是常用的消毒方法之一。

消毒方法，现在一般用无臭氧型紫外灯。消毒的效能与消毒的距离成反比，因此应根据消毒的目的适当设置消毒距离：进行空气消毒的灯管应距地面2.50m以内；台面的消毒应在0.80m以内;培养器皿的消毒在0.30m以内。

3）干热灭菌

  主要用于玻璃器皿的灭菌。

  将用于细胞培养的器皿包装后放入干燥箱内，加热到160℃，保温90 ~ 120 min。

  用于RNA提取实验的用品则需180℃，保持5-8h。

4）湿热灭菌

  此方法也称为高压蒸汽灭菌，适用范围广，是最有效的灭菌方法之一。主要应用范围是布类、橡胶制品（如胶塞）、金属器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液，如Hanks液、PBS、20 ×

 SSC（氯化钠和柠檬酸钠的缓冲液）等。用15MPa（121℃）作用20 min。

5）滤过除菌

  用于培养用液和各种不能高压灭菌的溶液的灭菌。采用金属滤器和小型的塑料滤器，配上可以更换的微孔滤膜，极大地方便了操作。滤器型号按直径大小划分。如过滤量大的培养用液常用较大型号的金属滤器（F142mm、F100mm和F90mm等），配于过滤泵使用。过滤量较少的培养用液常用注射器正压推动液体通过塑料小滤器（φ25mm、φ20mm和φ10mm等）。滤膜孔径有0.6μm、0.45μm、0.35μm、0.22μm、0.1μm等，以0.22μm除菌最为合适，但对于较黏稠难滤过的液体，可选用吸附性滤膜过滤。

  在过滤器上装上孔径适当的微孔滤膜，用布包好，湿热灭菌后使用。

6）煮沸灭菌

  急性灭菌可用煮沸法，器械等煮沸15min后可使用。效果不如高压蒸汽灭菌。

2.化学消毒法

常用的消毒液有如下几种。

  （1）70%（或75%）乙醇：超净台里常备70%酒精棉球（卫生级酒精），用于手和一些金属器械，或工作台面的消毒。

  （2）1‰新洁尔灭：主要用于手和前臂的清洗以及工作后的超净台面的清洁。超净台旁应常备盛有1‰新洁尔灭溶液的容器及纱布。

  （3）来苏儿水（煤酚皂）：主要用于无菌室的桌椅、墙壁、地面的消毒和清洗，以及空气喷洒消毒，特别是带有污染培养的培养器皿的消毒处理。使用浓度请按瓶上的说明。

  （4）0.5%过氧乙酸：是强效消毒剂，10min即可将芽孢菌杀死。用于各种物品的表面消毒。用喷洒和擦拭方式进行消毒。

  （5）乳酸蒸气：用于房间空气消毒。将乳酸放入坩埚内用洒精灯或电炉加热至沸腾为止，再将加热源关掉。门窗紧闭1~3d。可将空气中漂浮的微生物杀死。

  （6）37%甲醛加入高锰酸钾：也用于房间空气消毒。使用前先紧闭门窗。将37%甲醛用酒精灯或电炉加热至沸腾后断电或灭火。用一张纸盛好适量的高锰酸钾，迅速放入已加热好的甲醛中形成蒸气。1 ~ 3d后方可达到消毒空气的目的。