miRNA研究 您的位置：首页 > 实验方法 miRNA研究

原位杂交与显色操作步骤

点击次数：  更新时间：2018/4/25 14:45:00  

原位杂交与显色操作步骤

二．杂交与显色

1、将加入探针的杂交液先于50℃预热，均匀涂于切片表面，加上硅化盖玻片，放于湿盒中，50℃孵育12-16h。

2、1×SSC（含50%甲酰胺），50℃洗涤2次，每次10min。

3、2×SSC（含50%甲酰胺），37℃洗涤10min。

4、2×SSC（0.5ug/ml RNaseA），37℃洗涤30min。

5、1×SSC，50℃洗涤10min。

6、1×PBS（含0.1%Tween20），50℃洗涤2次，每次10min。

7、PBT室温洗涤10min。

8、封闭液处理1-1.5h。

9、加抗体（用封闭剂按1:500比例稀释），均匀地涂于切片表面，放于湿盒中，室温1-2h后4℃过夜（抗体1:500稀释于1×封闭液）。

10、PBT洗涤3次，每次15min。

11、显色缓冲液洗5min。

12、滴加显色液，黑暗中显色至适度。可在显微镜下多次观察。

13、显色终止液洗10min，双蒸水洗5次。

14、甲基绿（0.25%）滴加染色几秒中，双真水洗5min。

15、脱水封片。