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质粒提取（二）

点击次数：  更新时间：2018/4/25 15:41:59  

质粒提取

三、质粒的纯化

1. 1. 将之前提取好的质粒放入1.5ml离心管中，加入1/10体积的3mol/L 无菌乙酸钠溶液。

2. 2. 加入2倍体积的无水乙醇，放置于-20℃沉淀4-6h或过夜。

3. 3. 4℃，高速离心机14000rpm，离心20min.

4. 4. 弃去上清，70%乙醇洗2次。

5. 5. 空气干燥，可置超净工作台干燥。

6. 6. 加200ul无菌水溶液干燥后所得沉淀，即为质粒溶液。

7. 7. 紫外分光光度计测量质粒浓度和产量。

8. 测量OD₂₆₀和OD₂₈₀的值：质粒DNA浓度=OD₂₆₀×50×稀释倍数（μg/mL）。

四、培养基配方

1. 1.  LB液体培养基 100ml配方如下：

2. 胰蛋白胨                1g

3. 酵母提取物              0.5g

4. NaCl                    1g

5. DDW定容               100ml

6. 2. LB固体培养基 100ml配方如下：

7. 胰蛋白胨                1g

8. 酵母提取物              0.5g

9. NaCl                    1g

10. 琼脂粉                  1.5g

11. DDW定容               100ml

附录：

1. 1 OD260和OD280的比值表示质粒的纯度。比值大于1.8，说明纯化产物的纯度达到了90%。纯化好的质粒可用于转染实验，一般纯化步骤在细胞间内进行，提取和纯化好的质粒可以之列用于细胞实验。

2. 2 此方法用于小量DNA质粒的制备和提取，根据实验要求，选择不同载体可以克隆出所需质粒，提取和纯化步骤基本相同。其中关键步骤为内切酶的选用，可以参考PRIMER5等软件提供的内切酶筛选功能。