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总RNA的提取与提取前须知

点击次数：  更新时间：2018/4/4 9:42:09  

总RNA的提取：

      分子生物学研究中要了解目的基因的存在和表达，可通过提取组织或细胞中的总RNA检测该基因的信使RNA。总RNA的构成是比较复杂，包括核内RNA和胞质RNA，此外RNase是一类活性非常稳定的酶，可存在于细胞、空气尘埃、各种试剂和实验器皿、人的汗液和唾液等环境中。RNase具有耐热、耐酸碱的特性，煮沸也不能灭活，一般处理不宜去除RNase。因此，提取RNA时操作不慎易导致RNase的混入及降解RNA。

RNA提取前须知：

1、操作中戴口罩和手套

2、清洁无尘环境中操作，试验台、移液器要用75%乙醇擦拭消毒，也可使用RNase抑制剂，操作时避免大声喧哗和频繁走动。

3、玻璃器皿常规洗涤后，应用0.1%焦磷酸二乙酯（DEPC）浸泡处理，然后再用灭菌双蒸水漂洗几次，高压灭菌去除DEPC，160℃烘烤4h。

4、移液器枪头和离心管要经DEPC处理水处理、高压灭菌后使用。

5、提取后的总RNA定量后部分用于反转录，剩余RNA样品标记并用封口膜封口后-80℃可保存数月。

6、配置0.1%DEPC处理水 DEPC是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂，常用浓度为0.1%。1L配方：DEPC 1ml，蒸馏水 1L，摇床过夜，高压灭菌30min。