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培养基的配制

点击次数：  更新时间：2018/6/13 14:22:48  

（1）去离子水用蒸馏器进行重新蒸馏（去除无机和有机杂质），制成1000mL三蒸水。三蒸水应及时使用，如果放置一段时间，则使用前须高压处理三蒸水（15MPa，20min）。

（2）待水温降至15~30℃，加入合成培养基干粉，用磁力搅拌一定时间（2~4h）使之充分溶解。

（3）配制RPMI1640培养基时应通入适量CO₂加入6mol/L HCI调pH至6.0左右，这样才能充分溶解。而配制DMEM不需要此步骤。

（4）加入一定量NaHCO₃调节pH至6.9左右。

（5）加水至最终体积。

（6）打开超净工作台内的紫外消毒灯20min以上。在超净工作台中对溶液进行过滤除菌，分装入100mL或50mL无菌玻璃瓶中。

（7）瓶口封好，4℃冰箱储存（RPMI1640培养液可以—20℃储存）。

 

【注意事项】

（1）培养细胞使用的瓶子和饭盒应与提取RNA和培养细菌用的瓶子和饭盒严格分开。因为用于处理提取RNA的DEPC（0.2%焦炭酸二乙酯）是一种致癌剂，并可能影响细胞生长。而培养过细菌的用品也不应与培养细胞的混用，以免造成细菌污染。

（2）过滤时过滤泵的压力不要太大，否则使滤膜破裂，起不到除菌的效果。分装时需根据使用量的多少分装于大小合适的瓶子中，分装量为使用3~5次用完为宜，并且每瓶只能装2/3体积的液体，过多时会影响使用或产生污染机会。

（3）培养液过滤后pH可提高0.2~0.3，故在过滤前调节培养液pH至6.9左右即可，过滤后达到pH7.1~7.2。