植物DNA提取实验
点击次数： 更新时间：2018/7/7 16:19:28
真核细胞基因组DNA提取可以：（1）获得较纯的真核细胞基因组DNA；（2）用于后续PCR分析，RFLP分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。
实验原理：真核细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后纯化出DNA
实验步骤：
一、实验试剂及材料
1. 材料：幼嫩的植物材料0.5g左右。
2. 试剂：液氮，CTAB抽提缓冲液：2%CTAB(cetyl trimethyl ammonium bromide， 十六烷基三甲基溴化铵)，1%β-巯基乙醇 1.4mol/L Nacl，20mmol/L EDTA，100mmol/L Tris-Hcl pH8.0，3M NaAC，50mM Tris-HCl pH8.0，20mM EDTA，氯仿：异戊醇（24:1），异丙醇 ，70％乙醇，TE buffer。
二、实验方法
1. 取0.5 g植物材料，双蒸水洗净，并用滤纸吸干。
2. 植物材料剪成1 cm左右碎片，放入预冷的瓷研钵中。
3. 加入液氮速冷，研磨成细粉（越细越好）。
4. 在5 ml离心管中加入抽提缓冲液2.5 mll，60℃保温1小时。
5. 15 000 rpm，离心10分钟。上清转入另一个新的离心管中。
6. 加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），混匀抽提至水乳胶融状。
7. 15 000 rpm，离心10分钟。
8. 上清转入另一个新的离心管中。
9. 加入2/3倍体积预冷异丙醇，-20℃保温30 min-1 h，缓缓混匀DNA成絮状折出。
10. 15 000 rpm，离心10分钟，弃上清。
11. DNA沉淀用 70％乙醇洗2次。
12. 加入400 μl TE buffer溶解DNA
注意事项：真核细胞基因组较大，在操作中应注意动作轻柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学作用对DNA的剪切，从而获得相对完整的DNA。
文章转载自丁香通
