B 淋巴细胞膜表面免疫球蛋白（SmIg）的检查实验

实验方法原理	SmIg 是B 细胞的抗原识别受体，也是B 细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig 抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig 抗体可以与B 细胞表面的Ig 结合，在荧光显微镜下观察可见B 细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B 淋巴细胞。
实验材料	ICR 小鼠
试剂、试剂盒	异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig 抗体 Hank's液
仪器、耗材	台式离心机离心管吸管移液管
实验步骤	1. 采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目钢网研磨，混匀。从中吸取1 ml细胞悬液放入一试管中，加满Hank's液，离心1000 rpm，10 分钟，洗涤细胞一遍。倾去上清，沉积的细胞恢复1 ml容积，即为约1×10⁷ /ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1×10⁷ /ml的细胞悬液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即为1×10⁶ /ml的细胞悬液。 2. 取2 ml离心管两只，各加入1×10⁶ /ml的细胞悬液1 ml，用台式离心机离心2000 rpm，3 分钟，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100 μl，另一支不加抗体作对照，置4 ℃冰箱30 分钟。 3. 取出离心管，用Hank's 液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。

本文转载自丁香通

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