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大肠杆菌质粒DNA的提取实验

点击次数：  更新时间：2018/8/7 14:52:19  

实验原理：

质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。

实验步骤：

1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2 ml LB培养基。

2、37 ℃振荡培养过夜。

3、取1.5 ml菌体于Ep管，以4000 rpm离心3 min，弃上清液。

4、加0.l ml溶液I(1％葡萄糖，50 mM/L EDTA pH8.0，25 mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。

5、加入0.2 ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。

6、加入0.15 ml预冷溶液III(5 mol/L KAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。

7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管

8、加入等体积的异戊醇，混匀后于0 ℃静置10min。

9、再以10，000 rpm离心20min，弃上清。

10、用70％乙醇0．5 ml洗涤一次，抽干所有液体。

11、待沉淀干燥后，溶于0．05 mlTE缓冲液中

本文转载自丁香通