各种原核和真核表达载体

　　一，酵母表达系统

　　毕赤酵母表达系统（invitrogen公司）：分泌型质粒pPIC9K，

　　宿主菌毕赤酵母GS115

　　分泌型质粒pPICZalpha （甲醇诱导）宿主菌毕赤酵母x33

　　分泌型质粒pHIL-S1

　　二，原核表达质粒

　　表达宿主菌为BL21(DE3)系列

　　带His标签（N端）：PET5-(a)氨苄抗性

　　带His标签（N端）：PET28-(a)卡那抗性

　　带His标签（C端）：PET24-(b)卡那抗性

　　带His标签（C端）：PET21-(a)氨苄抗性

　　带His标签（N端）+TrxA(硫氧还蛋白)：PET-32a氨苄抗性

　　带His标签（N端）+DsbA(二硫键形成蛋白A)：氨苄抗性

　　带Gst标签（N端）：pGEX-KG，pGEX4T-1，pGEX-5x-1

　　共表达载体：pET-duet。(含有两个T7启动子)

　　表达宿主菌为M15系列

　　表达载体：pQE31

　　表达宿主菌为DH5a,JM109系列

　　热启动表达载体：pBV220

　　克隆载体

　　pGEM-7Z,pUC19

　　三，自研发原核表达载体

　　1，带His标签（N端）：PET-DsbA卡那抗性

　　2，带His标签（N端）：PET-DsbA（mutation）卡那抗性

　　说明：DsbA(二硫键形成蛋白A)是原核蛋白中氧化性最高的一类蛋白，具有分子伴侣的性质，能辅助底物蛋白尤其是基于一类含有多个二硫键的底物蛋白形成正确的折叠。以DsbA作为融合分子与目的蛋白进行融合表达时大都以可溶的形式存在，保证目的蛋白的正常生理功能和空间稳定折叠状态。

　　3，共表达载体：pET-duet-DsbA+DsbC。(含有两个T7启动子)

　　说明：此载体借用DsbA+DsbC蛋白的分子伴侣的性质，与所需的目的蛋白尤其是一类富含二硫键的目的蛋白进行共表达，辅助目的蛋白形成正确的空间折叠状态，共表达的优点是对表达的蛋白不需要切割带来的二次纯化。

　　4，改良版PET-32a：带His标签（N端）+TrxA(硫氧还蛋白)

　　说明：此载体表达的融合蛋白的N端带有His标签，可以通过一步亲和层析得到纯化，TrxA(硫氧还蛋白)与目的蛋白之间含有thrombin(凝血酶位点)和Linker（102bp）序列。

　　5，改良版PET-NusA：带His标签（N端）+NusA(角质蛋白A)

　　说明：此载体表达的融合蛋白的N端带有His标签，可以通过一步亲和层析得到纯化，NusA(角质蛋白)与目的蛋白之间含有thrombin(凝血酶位点)和Linker（102bp）序列。NusA可以让超过95%的外源蛋白获得可溶性的原核表达，但NusA不具有氧化性，分子伴侣的功能比较低。

　　四，真核表达质粒

　　PVAX1，pEGFP-N2，pGL-3control，pMir-report

　　pCMV-Myc在哺乳动物细胞中表达C端和Myc tag(Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。

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