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葡萄糖－6－磷酸脱氢酶荧光斑点试验

点击次数：  更新时间：2016/11/1 17:00:27  

 

葡萄糖－6－磷酸脱氢酶荧光斑点试验

在葡萄糖－6－磷酸（GbB）和NADP存在下，葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）能使用NADP还原成NADPH，后者在紫外线照射下不会发出荧光。

 

实验方法原理：

在葡萄糖－6－磷酸（GbB）和NADP存在下，葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）能使用NADP还原成NADPH，后者在紫外线照射下不会发出荧光。

实验材料：

G6P NADPHCl

试剂、试剂盒：

氧化型谷胱甘肽皂素蒸馏水

实验步骤

一、 实验试剂：混合试剂的成人与配方：

 

①0.1mol/L    G6P     1ml

②7.5mmol/L     NADP  1ml  

 

③0.7mol/L    tris－HCl（PH7.8）3ml

④8mmol/L       氧化型谷胱甘肽　1ml

⑤10g/L    皂素   2ml

⑥蒸馏水2ml

如混合试剂分装后－20℃保存，可稳定数月

 

二、实验操作：

 

1. 标本采集：EDTA·Na2H或肝素抗凝全血，若置4℃保存可稳定1周，亦可用肝素化毛细血管从手指或足踉采末梢血液。

 

2. 取12MM×75MM试管3支，患者．正常（对照）和阳性（对照），血各管加入追合试剂200微升．

 

3. 向各管分别加入患者正常和阳性的抗凝全血20微升，混合后置25℃室温中。

 

4. 在反应0／min（混匀后立即吸出）5min和10min时分别从各管吸出反应液1滴，加于新华1号液纸上，使充分干燥．

 

5. 在暗室内，用波长200-340nm的紫外线照射滤纸上的斑点，检查有无荧光．

 

6. 正常人的0min斑点无荧光，5min和10min斑点出现荧光，10min斑点荧光最强，G6PD缺陷患者在0min. 5min和10min均无荧光。

 

三、 实验结果：

正常人有甚强的荧光，G6PD缺陷患者荧光很弱或无荧光，杂合于或某些G6PD变异体者则可能有轻度到中度荧光．