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细胞两种划痕实验对比你知多少？

点击次数：  更新时间：2017/10/17 9:12:51  

实验原理：细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力。

实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

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传统实验方法

实验步骤：

将所需的材料进行灭菌，包括直尺和marker笔

1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2、在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。

3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。

4、PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。

5、放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。  

注意事项： 

1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。

2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%）否则细胞增殖就不能忽略。  

3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。

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Culture Insert方法

实验步骤：

准备材料：细胞，培养液，culture Insert，镊子。

1、准备细胞悬液：根据细胞类型将细胞悬液稀释至3-7×105个/ml，浓度控制在24小时内融合成单层。 

2、在培养插件的每个孔中加入70ul细胞悬液，放入培养箱中培养。

3、细胞贴壁后，使用灭菌的镊子移除培养插件。

4、加入无血清培养基培养。

5、每隔4-6小时拍照记录。

6、根据收集图片使用Wimasis分析实验结果。

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实验对比

	传统实验方法	Culture Insert方法
便捷程度	一般	非常便捷
成本	低	昂贵
划痕效果	划痕宽度不一	划痕宽度一致，可重复使用
损伤	对玻片表面包有一点损伤	可移除的插入元件，对玻片表面包几乎没有损伤