中洪博元有话说:
台盼兰染色法价格低廉,操作简单,又不用无菌操作,做这个实验只要是把显微镜调好了,细胞浓度调好了就不会有问题,是一个养细胞的入门实验,所以很适合初学者做。
中洪拥有专业的实验团队,一流的实验设备,今天和大家分享的台盼蓝检测细胞活性实验技术,希望大家能从中学到知识,获得启发。
实验原理
细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA 结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
(中洪博元实拍图)
实验步骤
1、4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。(106 细胞/ml)
3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。(终浓度0.04%)
4、计数:在三分钟内,分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。
结果统计
根据下式求细胞活力:
活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100
注意事项
1、台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。
2.、可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。