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小鼠多能ES细胞的增殖实验

点击次数：  更新时间：2017/2/14 15:33:24  

小鼠多能ES细胞的增殖实验

 

试剂、试剂盒 PBS、胰酶溶液

仪器、耗材 MEF滋养板、巴斯德吸管、ES 生长培养基

实验步骤

1. 准备下列试剂和材料：

 

60 mm MEF 滋养板（接种不能超过 7 天）

 

带棉塞无菌巴斯德吸管

 

无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

 

ES 生长培养基

 

胰酶溶液

 

2. PBS 冲洗 ES 细胞，巴斯德吸管加胰酶溶液覆盖培养皿底（2 ml/p60）

 

3. 37℃ 孵育 5 分钟左右，至细胞脱落。

 

4. 巴斯德吸管轻轻吹吸胰酶处理细胞 4~6 次，分散 ES 细胞。分散的细胞，包括单细胞和小的细胞团，转移至装有 2 ml 预热（37℃）ES 生长培养基的 15 ml 离心管。

 

5. 离心收集细胞。吸掉上清，留约两倍于细胞沉淀的体积。轻弹离心管悬浮细胞。加 10 ml ES 生长培养基，吹吸至悬液均匀。

 

6. 计数细胞。由于 ES 细胞较 MEF 细胞小，呈圆形，二者很容易区分。

 

7. ES 细胞接种 60 mm MEF 滋养板。吸掉 MEF 滋养细胞培养基，加入悬于 5 ml ES 生长培养基的 ES 细胞。

 

8. 每天换一次液，加 5 ml ES 生长培养基。