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慢病毒包装的实验步骤

点击次数：  更新时间：2017/4/24 14:08:40  

步骤:

例如以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×103个293T细胞。

首先要取1.5ml灭菌EP管，再往里面加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔的摇晃均匀，放入室温孵育5min。再取1.5ml灭菌EP管，然后取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔的摇晃均匀，放在室温孵育5min。我们要将DNA溶液和脂质体溶液轻柔的摇晃均匀，再放入室温孵育20min。在实验过程中我们还要用胰酶消化并记数293T细胞。要用含血清的培养基重悬细胞，并且在六孔板中每个孔板中，加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。再将1ml重悬的293T细胞（1×103个细胞/ml）加入到平板中。放在37℃CO2孵箱中孵育过夜。然后移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。在转染后的48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。要把病毒上清放在-80°C贮存好。