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动物细胞转染技术

点击次数：  更新时间：2017/8/15 12:17:57  

1.将HeLa细胞2×105个接种于35mm培养皿中，培养基为10%FBS的DMEM，37℃，5%CO2培养箱条件培养。

2.对GFP质粒进行除菌处理和浓度测定，可采用无水乙醇沉淀GFP质粒，再用70%的乙醇洗1或2次，将沉淀的质粒溶于灭菌的TE中，然后用紫外粉光关都系测出质粒的准确浓度，质粒的浓度（μg/ml）=OD260值×50μg/ml×稀释倍数。

3.当细胞融合约为80%时，开始进行转染处理。在一个1.5ml的EP管中，加入100μl无血清DMEM培养基，取2ugGFP质粒DNA溶解其中；在另一个1.5mlEP管中，加入100ul无血清DMEM培养基，取6-8ul脂质体转染剂稀释于其中，再将两管溶液混合均匀，室温下放置20min。

4.用2ml无血清DMEM培养基漂洗细胞2遍，向质粒DNA与脂质体转染剂的混合液加入0.8ml无血清DMEM培养基并混匀，然后加到漂洗过的细胞上。

5.将细胞放入培养箱培养3-8h，然后加入1ml含20%FBS的DMEM培养基继续培养。

6.培养24h后，将培养基吸出，加入2ml含10%FBS的DMEM培养基，37℃，5%CO2培养箱培养。

7.在荧光显微镜下实时观察细胞，表达GFP的细胞在蓝光激发下可呈现绿色荧光。

注意事项：

1.注意细胞的生长状态，最适合转染的细胞是达到指数生长期生长旺盛的细胞。

2.实验前进行预试验确定适当的接种量和培养时间。

3.DNA若不纯，会严重影响转染效率。