蛋白质表达分析 您的位置：首页 > 实验方法 蛋白质表达分析

体外SUMO修饰实验（一）

点击次数：  更新时间：2017/9/26 11:58:41  

小泛素相关修饰（SUMO）是生物内极为重要的一种蛋白翻译后修饰方式，是一类广泛存在于真核生物中且高度保守的蛋白质家族，它在调节蛋白质间相互作用、定位、转运、转录、细胞周期以及拮抗泛素化等方面均发挥着重要的作用。

SUMO修饰是指SUMO共价结合于靶蛋白的赖氨酸残基上，类似于泛素化但又不同于泛素化。SUMO通常是非活性的前体形式存在，在酶作用下水解几个氨基酸暴露出C端双甘氨酸残基，成为具有活性的SUMO分子。当ATP存在时，经SUMO活化酶E1、SUMO结合酶E2、SUMO连接酶E3的连续作用，最终与靶蛋白底物耦联形成异肽键，完成底物的SUMO修饰。

1、感受态细胞的制备

      

（1）准备LB培养基：0.5%酵母浸提物、1%胰蛋白胨、1%NaCl(PH 7.0),高压灭菌，4℃保存备用。

      

（2）准备LB琼脂平板：取新鲜配置的100-200ml的LB培养基，加入1.5g琼脂糖，高压灭菌，冷却至60℃，液体倒入已消毒的平皿中，凝固后4℃保存备用。

      

（3）无菌条件下，用接种环蘸取少量大肠埃希菌DH5a或IM109菌液，在不含抗生素的LB琼脂糖平板上划线，37℃过夜培养。

      

（4）从LB平板上挑取一个单菌落，放入含2mlLB培养基的试管中，37℃恒温摇床220rpm振荡培养过夜。

      

（5）取500ul菌液，转入含50mlLB培养基的培养瓶中，37℃恒温摇床180rpm振荡培养至OD600=0.8-1.0。