miRNA研究 您的位置：首页 > 实验方法 miRNA研究

细胞中mRNA原位杂交技术

点击次数：  更新时间：2018/6/2 14:01:46  

细胞中mRNA原位杂交技术

附表1：部分试剂配制

1 0.1mol/L三乙醇胺-0.25%乙酸酐：三乙醇胺13.2ml，氯化钠5g，浓盐酸4ml，DEPC水定容至约1000ml，临用前，一边摇动溶液一边加入乙酸酐2.5ml，充分混合。

2 10×PBS：氯化钠 80g，Na₂HPO₄·12H₂O₂ 32.3g，NaH₂PO₄·2H₂O₂ 4.5g。加DEPC水900ml，用HCl/NaOH调pH至7.2，最后定容为1000ml。

3 20×SSC（pH=7.0）：氯化钠175.3g，枸橼酸钠88.2g，DEPC水（ddH₂O）定容至1L。

4 100×Denhardts：Ficoll1g，PVP1g，BSA1g，DEPC水定容至50mL。

5 预杂交液：2×SSC，50%甲酰胺，100ug/ml变性鱼精DNA，5×Denhardts。

6 杂交液：2×SSC，50%甲酰胺,1×Denhardts,250μg/mL酵母tRNA或100μg/mL变性鱼精DNA,10mmol/L Tris-HC1 (pH7.5)，0.5％SDS，5％葡聚糖硫酸酯，标记探针。

7 PBT：1×PBS，0.1％Triton×100，2mg/mL BSA使用前加入。

8 封闭液：0.1mol/L Tris-HCI pH7.5，0.15mol/L NaCI，0.5％羊血清或2％BSA。

9 显色缓冲液：100mmol/L Tris-HCI pH9.5，100mmol/L NaCI，50mmol/L MgCl₂。

10 显色液：4.5μL/mL NBT，3.5μL/mL BCIP，用显色缓冲液配制。

11 显色终止液：0.1mol/L Tris-HCl pH8.0，10mmol/L EDTA。