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如何使用显微冷冻切片机对大（小）鼠脑组织切片

点击次数：  更新时间：2017/4/24 11:19:51  

  如何对大小鼠脑组织进行冷冻切片

  实验材料：大小鼠大脑

  试剂、试剂盒：手术器械、显微冷冻切片机、包埋剂

  仪器、耗材：大小鼠立体图谱

  实验步骤：

  1. 安装刀具，移上安全杆。调整切片机温度到-20 ℃(（右手边up 和down 二个按钮调节, up调高温度, down,降低温度）。

 

  2. 从-80 ℃冰箱取出脑组织在切片机或-20 ℃冰箱中放1小时左右，目的为了平衡组织温度，太冷会在切片时出现脑片破裂的情况。

 

  3. 用包埋剂（胶水代替）把组织固定在载物盘上（Blocker），注意一定要把脑放正。

 

  4. 后退样品固定器（specimen holder），固定载物盘，并适当调节摇杆， 使的上下左右都正。

  5. 打开安全杆，.前进载物盘，到适当位置（不要离的太近，以免不小心损坏刀，也不要离的太远）。

  6. 调整刀距（切片厚度，section thickness and trim thickness），摇动把手（handwheel），开始切片（sectioning）。开始的时候可以选择大一点的刀距（trim thickness, 10-500um），到一定位置时使用调到需要的最后切片厚度(section thickness, 1-20 um)。

 

  7. 到适当时候，贴几张脑片以确定上下左右是否正，并对照图谱找出大概位置。注意：贴片时手放在载玻片的两头，一端靠在切片机刀尾的位置轻轻往下压。

 

  8. 对照图谱找到所要找到的核团并各留具有SON，PVN，海马（CA1，CA2，CA3）的典型脑片，并作上标记。

 

  **PVN的确定：

  确定SON后，根据图谱算出所剩刀数，切去几刀后，贴片，用伊文斯蓝染色一分钟左右，倒去染液，放在显微镜下观察，开始出现PVN时呈芽状，然后芽变大, 并向上向外扩, 成伞状。

  9. 把脑片保存到-20 ℃或-80 ℃冰箱，以待以后使用。

  10. 清洁切片机，复原。