病毒培养实验——传代细胞培养法

关于病毒培养实验，由于病毒必须在易感的活细胞内才能增殖，因此，根据不同病毒选择敏感动物，离体组织细胞和鸡胚进行分离培养。

实验方法原理：

从人及动物某些组织，特别是肿瘤组织，经多次传代可建立传代细胞系，这种细胞能无限地传代，某些传代细胞对病毒敏感范围较广，可用作病毒的分离鉴定，如HeLa 细胞，Hep-2 细胞及KB 细胞。

三种细胞均来自人肿瘤组织细胞，HeLa 细胞来自子宫颈癌，Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上颚癌。由于这几种传代细胞有致肿瘤作用，目前仅用做病毒的分离鉴定及一些病毒学研究，不能用于疫苗的生产。

实验步骤：

将成片细胞的生长液倒掉，用Hank's 液洗一次。

加入适量的0.1～0.25% 胰蛋白酶，37 ℃孵育1 分钟。

将细胞倒放，细胞在上，胰酶在下，继续孵育37 ℃5～10 分钟。

将胰蛋白酶倒掉，再加入原量的生长液，用10 毫升吸管吹打分散细胞。

用生长液按原量3-4 倍稀释，即一瓶细胞能传3-4 瓶。

病毒接种及CPE 观察：

①取已长成单层细胞的培养瓶二只，用无菌毛细滴管吸去管中液体。

②用无菌的1 毫升吸管吸稀释的腺病毒液0.1 毫升加入一只单层细胞培养瓶中，另一只加0.1 毫升营养液不接种病毒作对照，细胞瓶平放，使其接触整个细胞层，置37 ℃使作用15～30 分钟。

③取出单层细胞瓶，每只瓶中加入营养液0.9 毫升，盖紧后置37 ℃孵箱中培养1～2 天。

④取出细胞在低倍显微镜下观察，注意有无出现CPE（细胞肿胀，变圆，集聚成葡萄串状等）。

另外我们需要思考的是：

1. 病毒为什么必须在活细胞内才能增殖？

2. 比较动物接种与鸡胚培养的优缺点?

3. 为什么目前广泛采用组织培养法培养病毒?

上一篇: 病毒培养实验——组织培养法--原代细胞单层培养

下一篇: 微生物的培养